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豚鼠ELISA試劑盒標本要求 1.標本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻進(jìn)行,提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
更新時(shí)間:2017-12-09
豚鼠ELISA試劑盒
試劑盒組成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 3ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 3ml×1瓶 | 8 | 標準品(960μg/L) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×4條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 10 | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 3ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 3ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個(gè) |
豚鼠ELISA試劑盒標本要求
1.標本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻進(jìn)行,提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?,用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
480μg/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
240μg/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
120μg/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
60μg/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
30μg/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn),根據樣品的OD值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開(kāi)封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn),做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準。