ELISA試劑盒自從60-70年代問(wèn)世以來(lái),得到科研工作者的認可及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內生化領(lǐng)域的長(cháng)足發(fā)展。
ELISA試劑盒標本保存,在ELISA試劑盒實(shí)驗中是非常重要的,常有ELISA操作員反映在標本保存時(shí)出現溶血、凝集不全、受細菌污染等現象發(fā)生,我公司技術(shù)員特針對相關(guān)常見(jiàn)問(wèn)題做出總結,下面我們就來(lái)看看天的內容:搞定ELISA試劑盒方法我有妙招!
一、標本保存不當
在冰箱中保存過(guò)久的標本,血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體,在間接法ELISA測定中會(huì )導致本底過(guò)深、甚至造成假陽(yáng)性;標本放置時(shí)間過(guò)長(cháng)(如一天以上),有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱,亦可出現假陰性。為克服上述干擾,ELISA測定的血清標本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5天內測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應充分混合后再測定,但混勻時(shí)應輕柔,不可強烈振蕩。
二、標本溶血
由于各種人為原因引起的標本溶血,均可因紅細胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過(guò)氧化物酶為標記的ELISA測定中,會(huì )導致非特異性顯色,ELISA試劑盒干擾測定結果。為克服上述干擾作用,標本采集時(shí)必須注意避免溶血。
三、標本凝集不全
在沒(méi)有促凝劑和抗凝劑存在的情況下,正常血液采集后1/2~2h開(kāi)始凝固,18~24h*凝固。臨床檢驗工作中,有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測,常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強行離心分離血清,此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊,易造成假陽(yáng)性結果;這類(lèi)情況于次日復查時(shí)因血凝已*,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復查結果變?yōu)殛幮?。為避免上述干擾作用,解決的辦法好是血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當的促凝劑。
四、標本管中添加物質(zhì)的影響
抗凝劑、酶抑制劑及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。
五、標本受細菌污染
因菌體中可能含有內源性辣根過(guò)氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結果。
做好了ELISA試劑盒因素和操作因素之后,確保檢測結果的準確性就容易的多了。